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熒光定量PCR儀技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用(二)
2012-06-19
3 在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用
3.1 病原體測(cè)定
PCR技術(shù)的問(wèn)世使病原體檢測(cè)能夠快速、方便地進(jìn)行。由于PCR技術(shù)假陽(yáng)性率太高，只要有微量病原體存在就可得到陽(yáng)性結(jié)果，這并不能作為診斷依據(jù)， 只有當(dāng)一定數(shù)量的病原體存在時(shí)才有臨床意義。因此，對(duì)模板準(zhǔn)確定量顯得特別重要，應(yīng)用熒光技術(shù)PCR儀就能夠快速、準(zhǔn)確地得到結(jié)果。對(duì)于解決免疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期”問(wèn)題，判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)，以及抗體檢測(cè)不能判定是現(xiàn)癥感染還是既往感染時(shí)，均可利用PCR進(jìn)行確定。
一些研究資料表明，病原體感染后的發(fā)病時(shí)間，病情輕重及預(yù)后往往與病原體數(shù)量相關(guān)。如HIV感染后，潛伏期長(zhǎng)短、臨床癥狀輕重與血液中病毒量顯著相關(guān)，甚至可根據(jù)HIV的量比較準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)發(fā)病時(shí)I 。在研究其他病毒感染性疾病是否有類似情況，病原體的致畸和致突變作用是否與病原體的量等有關(guān)問(wèn)題時(shí)，也可利用FQ—PCR來(lái)闡明。另?yè)?jù)研究發(fā)現(xiàn)，病毒的數(shù)量與某些藥物的療效相關(guān)。例如，干擾素對(duì)肝炎病毒高拷貝者不敏感，對(duì)低拷貝者敏感。因此利用FQ—PCR對(duì)某些病毒的定量分析可指導(dǎo)臨床用藥和制定治療方案。
3.2 腫瘤研究
盡管腫瘤發(fā)病的分子機(jī)制尚未完全闡明，但相關(guān)基因的遺傳學(xué)改變的積累是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已得到普遍承認(rèn)。癌基因的表達(dá)增加和突變?cè)谠S多腫瘤早期和良性階段就可出現(xiàn)，F(xiàn)Q—PCR 不但能有效地檢測(cè)基因的突變，而且能準(zhǔn)確測(cè)定表達(dá)量，據(jù)此進(jìn)行腫瘤早期診斷、分型、分期和預(yù)后判斷。某些癌基因的遺傳學(xué)變化的檢測(cè)幾乎達(dá)到確診腫瘤的程度。例如，CD 基因的異常拼接表達(dá)，幾乎只有出現(xiàn)于某些泌系腫瘤。對(duì)于有慢性骨髓性白血病都可檢測(cè)到原癌基因易位導(dǎo)致的BCR/ABL融合基因形成，F(xiàn)Q—PCR技術(shù)不但可通過(guò)檢測(cè)BCR/ABL融合基因的表達(dá)而進(jìn)行腫瘤診斷，還可檢測(cè)治療中和治療后
微量殘余惡性細(xì)胞存在的數(shù)量，以此作為治療效果
和估計(jì)復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性的依據(jù)。
3.3 其他方面
在基因表達(dá)研究中， 由于FQ—CPR的應(yīng)用，對(duì)mRNA的檢測(cè)顯得較以前常用的方法， 如Northem印跡、RT—PCR定量法要方便、快速、準(zhǔn)確得多。在免疫組分析中，對(duì)免疫T細(xì)胞群體V—p組織進(jìn)行分析是研究健康和疾病免疫應(yīng)答反應(yīng)的重要手段。利用FQ—PCR技術(shù)進(jìn)行分析，克服了原來(lái)分析方法如流式細(xì)胞法、競(jìng)爭(zhēng)性PCR技術(shù)等操作復(fù)雜，準(zhǔn)確性低，污染嚴(yán)重的缺點(diǎn)。
4 結(jié)語(yǔ)
綜上所述，F(xiàn)Q—PCR作為一種核酸定量技術(shù)，在以前的PCR技術(shù)上得到進(jìn)一步發(fā)展，大大降低了假陽(yáng)性率，工作效率高，結(jié)果重現(xiàn)性好，且不必使用對(duì)人體有害的染色劑。FQ—PCR應(yīng)用較多且較成熟主要是在病原體檢測(cè)方面，其優(yōu)越性在此也得以充分體現(xiàn)。因此將其應(yīng)用于臨床具有很大潛力。在腫瘤、遺傳病研究，尤其
是基因表達(dá)方面的研究，該技術(shù)應(yīng)用還較少，在這方面加強(qiáng)研究應(yīng)用，將會(huì)有廣闊的前景。將生物基因芯片技術(shù)與FQ—PCR技術(shù)結(jié)合，有助于PCR技術(shù)的進(jìn)一步完善，推動(dòng)該技術(shù)的發(fā)展、應(yīng)用。
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